啮齿动物自愿饮用含酒精的水（A-DW模型）是建立酒精性肝病最简便的方法, 同时也模仿了人类饮酒的方式及习惯。在人类中, 酒精摄入可以是急性的、短期的[暴饮, （20~50） g/d], 在数小时内一次性摄入, 也可以是长期的（慢性, ≥30 g/d）, 持续数年或几十年。A-DW动物模型指在数小时、数天或数周的饮水中添加乙醇, 一般先从5%（v/v）开始, 逐渐增加乙醇10%~40%（v/v）, 至小鼠耐受的最高浓度, 同时不限制动物食用标准啮齿类饲料^[25]。一般情况下, 口服酒精的啮齿类动物的平均血液酒精浓度（BAC）通常低于150 mg/dL, 长时间喂养会出现轻微的肝脏脂肪变性和炎症, 但不会进展到肝纤维和肝硬化的阶段^[25], 短期或长期喂养无死亡率^[13]。 如果与含有乙醇的水与酒精脱氢酶抑制剂一起服用, 通过减缓其新陈代谢来提高BAC, 则可以获得更高的BAC。或者, 可以添加香料使酒精味道更好, 来吸引动物主动饮酒。

为了保持饮食控制及克服啮齿动物天生厌酒特性, Lieber和De Carli开发了一种含有乙醇和其他营养成分的液体饮食（L-D）^[14]。L-D是一种等热量控制的流质饮食, 其高达36%的热量来自酒精。啮齿类动物除了含有乙醇的液体饲料外, 不给予任何食物和水, 配对喂养的对照组维持热量和营养相当的对照饮食, 其中酒精被麦芽糖糊精所取代。在前1周适应期内, 酒精浓度逐渐升高, 直至适应。通常情况下小鼠平均每天可维持（12~18） g/kg的高酒精摄入量, 比直接在饮用水中添加酒精多2~3倍, 且动物在整个饲养期都保持最高的BAC^[35]。该模型可以诱导CYP2E1激活、氧化应激产生、肝脂肪变性、血清转氨基酶轻微升高、肝内甘油三酯升高和肝细胞损伤的早期^[36]。因此Lieber-De Carli模型是研究ALD轻度脂肪变性、转氨酶轻度升高和轻微炎症的极佳模型^[37]。但是此种模型长期喂养也不会发生肝纤维化及肝硬化。且饲料价格昂贵, 需要每天更换饲料, 对饲养瓶也有一定要求。

为建立更好的ALD动物模型, Gao-binge等在L-D液体酒精饲料的基础上, 开发出一种新的动物模型（NIAAA模型/Gao-Binge模型）。即小鼠接受含有乙醇的液体饲料适应1周, 并在这1周内逐渐增加至5%乙醇浓度, 后继续该浓度的L-D液体酒精饲料喂养10 d, 于第11天清晨7~9点空腹状态下灌胃乙醇（5 g/kg）, 9 h后处死^{[38, 39]}。这种方法可以延长8~12周慢性喂养, 并结合每周2~3次灌胃^[36]。与L-D模型相比, 可引起更高的BAC, 严重的脂肪变性及肝脏损伤, 炎症细胞浸润。即使延长喂养时间, 也只引起中等程度的酒精性脂肪性肝炎, 没有表现出纤维化及肝硬化^[18]。这种模型会导致小鼠体重下降和高死亡率, 长期喂食和多次灌胃乙醇的组合是具有一定挑战性的。

为了克服与口服酒精相关的BAC的局限性, 达到ALD晚期, Tsukamoto和French开发了一种直接胃内插管喂养模型（Tsukamoto-French 模型）^[25]。在无菌条件下将导管植入胃内, 酒精被添加到L-D液体饲料或高脂的液体饲料中^[37], 并在输液泵的帮助下通过植入的导管直接注入胃内。此模型实现了对营养素或任何液体试验物质的胃内输送的绝对控制。能精确控制喂食量或给药速率（量）和模式（连续、间歇或团注）^[16]。这种胃内插管喂养模式的优点是既避开了啮齿动物对酒精的自然厌恶, 也消除了动物饮酒量的障碍, 达到持续的高血液酒精水平。肝损伤和纤维化可在相对较短的时间内重复诱导, 但纤维化程度相当中等, 且不会发生肝硬化^[34]。在实际操作中, 该模型仍有些限制。如给药的饮食或物质必须是液体形式, 需要专业操作人员和慢性输液旋转输液设备, 且设备昂贵, 饲养环境要求高, 操作困难, 啮齿动物易感染而死。

为了建成更好的酒精性肝病动物模型, 很多研究者在上述模型的基础上加入不同化学诱导剂, 如四氯化碳（CCl₄）^{[17, 40]}、硫代乙酰胺（TAA）、二甲基亚硝胺（DMN）或二乙基亚硝胺（DEN）^[40]、脂多糖、吡唑、对乙酰氨基酚（APAP）等化学诱导剂^{[19, 26]}, 这种增加诱导剂的方法虽然能更高效地建成研究者所需的各型动物模型。但最终建成的模型往往难以解释是由于酒精因素还是化学诱导剂因素引起的。

3.5.1 四氯化碳（CCl₄）诱导模型 四氯化碳（CCl₄）是一种应用最广泛的肝毒素诱导剂。可通过腹腔或皮下注射、口服及吸入的方法进入体内^{[17, 40, 41, 42, 43]}, 但口服及吸入的方法没有腹腔注射CCl₄所诱导的肝纤维化明显, 且时间较长。在最常规造模中, 将CCl₄溶于一定比例的橄榄油中, 每周腹腔注射2~3次, 剂量范围为（300~1 000）μ L/kg, 同时也有研究报道C57BL/6小鼠模型通过腹腔注射剂量为（0.5~0.7） μ L/g的CCl₄, 2次/周, 共6周, 或3次/周, 共4周, 可明显诱导肝纤维化^[44]。CCl₄（750 mL/kg, 2次/周, 共9周）诱导的Sprague-Dawley大鼠出现严重的纤维化。皮下注射能降低小鼠死亡率, 但在注射部位会长出肉芽肿。吸入的方法仍有一定局限, 如对设备的要求以及相关人员培训等。目前, 口服CCl₄的方法仍有很大争议。CCl₄诱导肝脏生物转化依赖于CYP2E1途径, 促进自由基反应和脂质过氧化。因此, 可诱导小叶中央坏死, 炎症细胞聚集, 胶原纤维的产生及细胞外基质被激活, 肝星状细胞激活后导致肝纤维化及肝硬化^[45]。

3.5.2 其他化学诱导模型 除了CCl₄诱导外, 硫代乙酰胺（TAA）是仅次于CCl₄的肝毒素诱导的第二大模型, 同样也可通过腹腔注射、口服进入体内。腹腔注射TAA的方式是将TAA溶解在生理盐水中（剂量根据体重进行调整）再进行注射。关于使用TAA 诱导肝硬化的方案有多种, Boyer-Diaz等^[46]使用SD大鼠, 通过腹腔注射TAA溶液（250 mg/kg）, 在12 周内建立进展期慢性肝病模型。Uehara等^[40]使用二乙基亚硝胺（DEN）联合四氯化碳诱导小鼠晚期肝硬化及肝癌的动物模型。LU等^[47]联合使用CYP2E1诱导剂吡唑及脂多糖（LPS）, 建立LPS/吡唑协同毒性小鼠模型, 表明了CYP2E1可增强LPS诱导肝损伤。

转基因模型已经被用来评估特定因素在纤维化形成中的作用。一般说来, 基因敲除鼠（KO）中纤维化的增加（或减少）与野生（WT）组相比, 自发的或对促纤维化刺激的反应, 将表明该基因产物直接或间接地发挥抗纤维化（或促纤维化）的特性。众所周知, 在饮酒过程中, CYP2E1及ALDH2与ALD的氧化应激、DNA损伤有关, ALDH2缺乏会引起过量的乙醛积聚和氧化应激, 导致线粒体DNA损伤。Seo等^[48]使用C57BL/6N背景下ALDH2全基因敲除（Aldh2Hep-/-）建立酒精相关性肝癌。Kwon等^[49]发现乙醛脱氢酶2敲除小鼠可改善酒精性脂肪肝但加重肝脏炎症和纤维化。CYP2E1过表达的小鼠增加ALD的严重程度, 在CYP2E1缺失的小鼠可减轻ALD的严重程度。如Lu等^[47]使用CYP2E1敲除小鼠的研究表明乙醇具有一定毒性且能加重小鼠肝脏的损伤程度。Zhou等^[50]用肠道特异性SIRT1缺失基因敲除小鼠表明肠道SIRT1对酒精性肝损伤具有不利影响。Xu等^[51]给予脂肪特异性蛋白27转基因小鼠（Fsp27Hep-/-）5%乙醇液体饲料喂养, 并联合多次灌胃, 结果表明FSP27的过表达与乙醇暴露对小鼠肝细胞线粒体活性氧的产生和肝细胞的损伤具有协同作用。酒精通过解除对肝脏miRNAs的调控, 影响参与不同细胞功能的蛋白质的表达。如在miR-155敲除的小鼠模型显示, 慢性酒精灌胃后, 肠道炎症减轻, 血清中LPS增加, 促炎细胞因子减少, 肝脏损伤和纤维化减轻^[52]。巨噬细胞与酒精相关的脂多糖高反应性与miR-155介导的Toll样受体（TLR）信号负调控因子的表达减少, 而抑制miR-122基因可加速酒精引起的肝损伤, 如在酒精性肝硬化患者及酒精喂养的小鼠中miR-122表达明显降低^{[19, 22]}。越来越多的证据表明, 在不久的将来, 转基因背景的啮齿动物会越来越丰富, 可能成为探索ALD新机制的宝贵工具。