已在结核分枝杆菌基因组中检测到各种移动遗传元件（mobile genetic elements, MGEs）或称为“ 跳跃基因” 。这些元件能够在转座过程中从一条染色体位置移动到另一条染色体位置, 并且他们的动态性质与几种病原菌的表型特征有关。插入序列（insertion sequence, IS）6110 的 MGE 已被广泛用作流行病学研究中的基因型标记^[15]。结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC）包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等, MTBC的大多数成员在基因组的重复区域都具有IS6110元件, 这被认为是MTBC进化早期的原始插入位点^[16]。由于IS6110在MTBC中具有高度保守性和多个拷贝, 故常被用作MTBC检测分子标记。然而, 存在具有低拷贝或缺失IS6110的MTBC菌株^[15]。为了克服基于IS6110的诊断方法带来的缺点, IS1081常被作为辅助标记, 因为他也是MTBC菌株中具有特异性的多拷贝元件, 稳定为5~6个拷贝^[17]。迄今为止, 研究已发现多种用于LAMP技术诊断结核病的分子标志物, 包括IS6110、IS1081、mpb6、pstS1、sdaA、gyrB等^{[18, 19, 20, 21, 22]}。

Iwamoto等^[23]首次报道使用以MTB中的gyrB基因引物为靶向的LAMP技术诊断肺结核, 向反应管中加入SYBR Green, 使扩增可视化。该LAMP测定在分离结核分枝杆菌复合菌株的18个痰标本中的16个中具有阳性反应。自此, 越来越多的研究表明 LAMP可用于结核病的诊断^{[24, 25, 26]}。2013年, Kaewphinit等^[27]开发了LAMP技术结合侧向流动试纸（lateral-flow dipstick, LFD）检测临床样本中的MTB, 反应结束后, 在LFD上可检测到与异硫氰酸荧光素标记的DNA扩增产物。此结合技术的优点是缩短了检测时间, 减少了电泳分析步骤, 且数据表明 LAMP-LFD 可以检测低至 5 pg 的MTB基因组 DNA。但是常规探针很可能会发生引物与探针自聚合, Jaroenram等^[28]在LAMP-LFD技术上做进一步优化, 引入1组新的引物、DNA 探针系统。即3' 端用dSpacer标记, 以防止探针发生自聚合, 且实现一步法、同步 DNA 杂交的LAMP-LFD对MTB进行超灵敏检测。此外, LAMP与侧向流动生物传感器（lateral flow biosensor, LFB）相结合的方法也常被用来检测MTBC, 其用异硫氰酸荧光素、生物素标记引物和扩增产物, 使 LFB 可视化^[20]。

常用的单分子标志物gyrB、IS6110、IS1081和16S rRNA^{[25, 29]}等是检测肺结核的良好标志, 多靶向环介导扩增（multi-targeted loop mediated amplification PCR, MLAMP）具有更高的灵敏性和特异性。Wang等^[20]基于LAMP-LFB技术采用 MTBC 的IS 6110和 IS 1081多靶标设计两组引物, 可检测到低至 10 fg 的DNA, 分析灵敏度高于基于单靶标的 LAMP检测^[27]。此外, IS1081和 IS6110的组合可以保证流行的 MTBC 菌株的高灵敏性和高特异性。Yang等^[30]通过检测参考菌株和临床标本证明IS6110和mtp40MLAMP具有优异的特异性和灵敏性。多靶向分子标志物弥补了单靶标的不足之处, MLAMP方法可有效提高诊断性能。

结核病感染最常见的部位是肺部, 但通过血液传播可以到达全身的各个系统, 导致肺外结核病（extrapulmonary tuberculosis, EPTB）, 包括骨骼系统结核、泌尿系统结核、消化系统结核等。EPTB约占结核病例总数的22%^[31]。EPTB的诊断非常具有挑战性, 因为通常需要进行侵入性手术才能获得脑脊液和胸腔积液等标本, 并且EPTB 标本的培养灵敏性较低。Yu等^[32]将LAMP技术与临床疑似EPTB的复合参比标准和培养物的性能进行回顾研究, 通过二元随机效应模型进行荟萃分析, 标本包括脑脊液、胸腔积液、滑液、脓液、淋巴腺细针穿刺等, 研究发现LAMP在检测EPTB方面具有良好的诊断效果, 且使用mpb64靶序列的诊断效果优于IS6110。随着LAMP技术的发展, MLAMP技术多靶向分子标志物可以提高肺外样本的检出率。MLAMP技术快速、易用性和低成本使其成为资源有限的环境中的绝佳替代品^[33]。

耐多药结核病 （multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB）对结核病治疗中的两种关键药物异烟肼（isoniazid, INH）和利福平（rifampicin, RIF）具有耐药性。INH最常见的突变区域在 katG 和 inhA 基因, katG S315I、S315N、S315T 以及组合的移码和过早终止密码子是 INH 抗性的高可信度标记, 而 inhA 启动子15突变是一种中等置信度的抗性突变^[43]。大约78%~100% MTB利福平耐药在RNA聚合酶亚基β （rpoB）基因的81 bp区域（利福平耐药性决定区）, 其与 RIF抗性相关性最高^[44]。 rpoB D516V、H526D、H526Y和S531L是高置信度标记, 而L533P是RIF抗性的中等可信度标记。MDR-LAMP 检测是一种基于 LAMP 平台的人工突变位点检测方法探针检测, 涵盖rpoB、katG 和 inhA 基因的重叠 RIF 抗性决定区以及 rpoB 基因的上述突变、katG 基因的密码子 315 处的突变以及 inhA 基因的启动子 15 处的突变。Liu等^[45]使用从中国结核病国家参考实验室获得的 100 株MTB分离株, 以异烟肼和利福平的表型耐药以及全基因组测序作为参考标准, 评估 MDR-LAMP 检测方法。该研究发现MDR-LAMP 对异烟肼和利福平耐药性检测的灵敏性和特异性较高。针对RIF的耐药性, Takarada等^[46]开发了使用LAMP结合单标签杂交（single-tag hybridization, STH）色谱打印阵列条（chromatographic printed array strip, PAS）方法, 该技术能够同时检测利福平耐药性决定区中的4个突变, C1349 T、A1295C、G1303 T、A1304 T。这是一种简单快速地检测临床分离株中点突变的方法, 作为床旁检测技术可以满足耐药细菌流行地区的需求, 尤其是发展中国家。

当前LAMP 技术在诊断结核病中已经得到了广泛的应用, 但该技术仍存在部分缺陷, 如易产生假阳性, 扩增的梯度性条带的带型存在差异, 集成检测设备不成熟, 引物设计难度大等。为了克服以上缺点, 不断有新技术涌现且有效提高LAMP 技术检测MTB的特异性、灵敏性和便携性, 如将LAMP技术与基于纳米颗粒的LFB^[47]、CRISPR-Cas12^[48]及微流控芯片等技术的联合应用。总之, LAMP 技术作为一种新型核酸扩增检测技术, 在现场快速检测和基层应用于诊断结核病的领域较广阔, 但仍需要不断深入研究, 推动医疗健康事业的发展。

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编辑：王佳燕