引用本文
唐振, 庞晓泸, 叶瑞国, 庞贤武, 宁珺茹, 林瑞玲, 黄佐妮. 广西玉林市2015—2020年HIV抗体不确定结果的随访分析[J]. 中国热带医学, 2022,22(7): 651-655.
TANG Zheng, PANG Xiao-lu, YE Rui-guo, PANG Xian-wu, NING Jun-ru, LIN Rui-ling, HUANG Zuo-ni. Follow up analysis of HIV antibody indeterminate results in Yulin, Guangxi, 2015-2020[J]. China Tropical Medicine, 2022,22(7): 651-655.  
Doi: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2022.07.12
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广西玉林市2015—2020年HIV抗体不确定结果的随访分析
唐振1, 庞晓泸1, 叶瑞国1, 庞贤武2,*, 宁珺茹1, 林瑞玲1, 黄佐妮1
1.玉林市疾病预防控制中心,广西 玉林 537000
2.广西壮族自治区疾病预防控制中心,广西 南宁 530021
∗通信作者：庞贤武,E-mail：ylcdcjyk1@163.com

作者简介：唐振（1977—）,男,硕士,副主任医师,研究方向：艾滋病等传染病预防控制。 庞晓泸（1986—）,女,本科,副主任技师,研究方向:病原体分子流行。

收稿日期: 2021-12-31
摘要

目的 探讨人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）抗体不确定结果转归特点及HIV-1病毒载量检测在HIV抗体不确定诊断中的应用。方法 收集2015—2020年广西壮族自治区玉林市HIV抗体筛查为HIV抗体有反应的样本,使用胶体金和胶体硒两种快速法检测试剂复核,出现单反应或双反应的标本使用蛋白免疫印迹法（Western-blot, WB）进行确证试验,WB结果为不确定的样本检测其HIV-1病毒载量作为补充试验并在1~4周后进行随访。结果 2015—2020年共收到HIV抗体确证检测样本4 906人份,不确定结果153人份（3.12%）,最终完成随访并有检测结果91例。在91例中有59例阳转（64.84%）,32例阴转（35.16%）;复核双反应和单反应的阳转率分别为94.74%（54/57）和14.71%（5/34）;WB结果为2条带以上的阳转率为89.80%（44/49）,WB结果仅有1条带的阳转率为35.71%。91例随访中病毒载量>5 000 CPs/mL的有59例,阳性率为90%,病毒载量≤5 000 CPs/mL的有32例,阳性率为0。结论 HIV抗体复核出现双反应且WB至少2条带型的样本阳转率比较高;HIV抗体复核仅单反应且WB仅有1条带型的也有感染的高风险,可检测HIV-1病毒载量以尽早确定患者是否感染HIV病毒。

关键词: HIV抗体不确定; 蛋白印迹试验; HIV-1病毒载量
中图分类号:R737.33 文献标志码:A 文章编号:1009-9727(2022)07-651-05
Follow up analysis of HIV antibody indeterminate results in Yulin, Guangxi, 2015-2020
TANG Zheng1, PANG Xiao-lu1, YE Rui-guo1, PANG Xian-wu2, NING Jun-ru1, LIN Rui-ling1, HUANG Zuo-ni1
1. Yulin Municipal Center for Disease Control and Prevention, Yulin, Guangxi 537000, China
2. Guangxi Center for Disease Prevention and Control, Nanning, Guangxi 530021, China
Corresponding author：PANG Xian-wu, E-mail: ylcdcjyk1@163.com
Abstract

Objective To explore the characteristics and outcomes of indeterminate Western-blot (WB) results for HIV antibody and application of HIV-1 viral load test in diagnosing human immunodeficiency virus (HIV) antibody indeterminate cases.Methods The samples that were initially screened as HIV antibody positive reaction in Yulin, Guangxi Zhuang Autonomous Region from 2015 to 2020 were collected, and rechecked with two different rapid test reagents, colloidal gold and colloidal selenium. The samples with single reaction or double reaction were tested by Western Blotting. If the results were indeterminate, HIV-1 viral load test was used as supplementary test, follow-up was performed 1-4 weeks later.Results There were 153 (3.12%) uncertain WB result of total 4 906 individual samples from 2015 to 2020. And 91 cases were followed up,of which 59 cases (64.84%) returned positive and 32 cases (35.16%) returned negative. Among the 91 follow-up cases, the positive rates of response in two rapid test and in only one of the rapid test were 94.74% (54/57) and 14.71% (5/34) respectively. In 49 cases, the band type was 2 bands or more, and the fellow-up positive rate was 89.80%. 42 cases with one band, the fellow-up positive rate was 35.71%. Among the 91 individuals, HIV-1 viral load of 59 cases (90%) was up to 5 000 CPs/mL, 32 individuals were not infected which HIV-1 viral load was lower than 5 000 CPs/mL.Conclusions Two positive response of the double-check with WB bands 2 or more, indicates a very high risk of infection, while only one positive response or indeterminate result with only 1 band also suggests a high risk of infection. Combination with HIV-1 viral load test can confirm whether infection or not earlier.

Keyword: HIV antibody with indeterminate result; Western Blot; HIV-1 viral load

国家统计局发表的监测数据表明, 中国艾滋病新发感染病例逐年增长[1], 艾滋病防控任务仍然艰巨。实验室检测在整个艾滋病的防控战略中起到至关重要的作用。在最新版的诊断标准[2, 3]中, 以及《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）中, 将核酸检测纳入了补充试验中, 但是从成本方面考虑, 当前使用最广泛的补充试验方法是蛋白免疫印迹试验（Western-blot, WB）。由于受到检测方法本身局限性、生物样本的复杂性以及其他因素的影响, 有一定数量的HIV确证试验结果为不确定。按照技术规范要求, 对不确定的样本需要2~4周随访再次进行WB试验或HIV-1核酸检测。随着玉林市HIV确证实验室检测量不断增加, 标本来源日益复杂, HIV抗体不确定的结果有所增多。这种不确定的结果不仅给艾滋病防治带来诸多问题, 还会对受检者造成极大的身心影响。为解决此类问题, 对玉林市2015— 2020年HIV抗体不确定的样本结果进行随访分析, 探索抗体不确定结果最优的检测策略。

1 对象与方法
1.1 样本来源

2015— 2020年玉林市疾控中心艾滋病确证实验室收到的全市筛查结果为HIV抗体阳性样本, 经复核、确证后有153例HIV抗体不确定样本。在检测出不确定结果后, 1~4周内对不确定受检者进行随访, 最长随访时间169 d, 最终随访到91例。

1.2 检测方法及试剂

1.2.1 复核检测 筛查为阳性的样本同时使用韩国SD公司的人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）和美国雅培公司的人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体检测试剂盒（胶体硒法）检测, 具体操作参照试剂盒说明书。

1.2.2 补充试验 （1）蛋白免疫印迹法：使用新加坡MP公司的人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）。结果判定标准为：不出现HIV特异性条带或只有p17条带为阴性; 检测出2个ENV（gp160、gp41、gp120）及任何一条GAG（p17、p24、p55）或POL（p31、p51、p66）特异性条带为阳性; 出现任何特异性条带, 但不足于被判断为阳性为不确定。（2）HIV-1病毒载量定量检测：人类免疫缺陷病毒（Ⅰ 型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）, 德国罗氏生物公司。

1.3 研究策略

将收集到的筛查为HIV阳性的标本进行复核检测试验, 其中一种或两种试剂有反应者则重新采集标本（同时采集适用于核酸试验的标本）, 进行第二次复核检测和WB试验, WB结果为不确定的病例, 进行HIV-1核酸检测。1~4周后进行随访, 如不确定者为孕产妇, 在得到阴性结果后仍增加一次随访。最后按照WS293-2019的标准进行判断其阴性或阳性结果。

1.4 统计学分析

用SPSS 26进行统计分析, 率的比较采用χ 2检验。

2 结果
2.1 HIV抗体检测结果

2015— 2020年玉林市艾滋病确证实验室共收到全市各医疗卫生单位送检HIV抗体筛查阳性的标本5 417份, 有4 906份标本进行了WB确证试验, 其中结果为不确定的标本有153份, 占WB试验总标本数量的3.12%。153例不确定者中有91例完成随访检测, 62例失访, 随访率占59.48%。随访时间最短7 d, 最长169 d。其中59例随访确认为HIV感染, 32例确认为阴性, 阳转率占64.84%。

153例HIV抗体不确定的标本主要来源于临床可疑（77例, 50.33%）, 其次是自愿咨询者（46例, 30.02%）、孕产妇（13例, 8.50%）和其他人群（献血人员, 儿童, 婚前检查）。91例完成随访者中, 孕产妇均为常规孕检, 并否定身体有病理上的不适, 阳转率最低, 为0; 临床病例的阳转率最高, 为90.00%, 标本来源不同人群阳转率差异无统计学意义（χ 2=40.653, P> 0.05）, 所以无法依据人群来判定WB结果为不确定患者阳转率, 具体不同人群不确定结果归转情况见表1。

表1 91例WB结果为不确定样本随访转归情况 Table 1 The WB result of 91 cases was indeterminate sample follow-up situation
2.2 不确定标本WB带型分布情况

153例不确定者中出现了15种WB带型, 其中出现最多的是gp160, 占33.33%; 其次是gp160+p24和p24, 分别占31.37%和10.46%, 其余条带占比较少, 分布见图1。

图1 HIV抗体不确定WB带型分布Fig. 1 Indeterminate WB banding pattern distribution of HIV antibody

2.3 HIV抗体复核结果的随访转归情况

本研究成功随访的91人中, 胶体金和胶体硒均有反应（以下称双反应）的阳转率为94.74%（54/57）; 仅有一种试剂有反应（以下称单反应）的标本阳性率为14.71%（5/34）, 为临床可疑样本, 复核双反应和单反应的阳转率差异有统计学意义（χ 2=35.00, P< 0.01）。WB带型与复核检测时胶体金、胶体硒法结果和统计学分析见表2~表3。

表2 WB带型与快速法检测双反应时WB带型归转情况 Table 2 WB bands pattern and rapid detection of WB banding pattern reversion in double reaction
表3 WB带型与快速法检测单反应时WB带型归转情况 Table 3 WB banding pattern and rapid method to detect WB banding pattern reversion
2.4 WB带型与HIV-1病毒载量的检测结果与随访结果

我们对91例不确定结果进行HIV-1病毒载量检测, 其中病毒载量> 5 000 CPs/mL有59例, 最后阳转率为100%, 病毒载量≤ 5 000 CPs/mL有32例, 最后阳转率为0, 不同病毒载量的阳转率差异有统计学意义（χ 2=41.1158, P< 0.01）。不确定带型为gp160+p24的阳转率最高, 为90.6%（29/32）; gp160阳转率则是35.5%（11/31）。经4周随访后对不确定患者重新检测后, WB结果为2条带以上的阳转率为89.80%（44/49）, WB结果仅有1条带的阳转率为35.71%（15/42）, 单带型与组合带型的阳转率差异有统计学意义（χ 2=29.0124, P< 0.01）。见表4。

表4 不确定标本 带型与HIV-1病毒载量结果回访归转情况 Table 4 Indeterminate specimen bands pattern and HIV-1 viral load results return visit and returm
3 讨论

本研究使用的WB抗体确证试验的不确定结果为3.12%, 与国内一些报道相近[4, 5], 也比一些报道低[6, 7]。导致HIV抗体不确定的因素有很多[1], 可能是某些病原体的感染、肿瘤肾衰竭及免疫性疾病、怀孕、注射疫苗、试剂间的不同特异性、非特异性免疫或实验人员操作不当等所致, 也有可能是HIV感染的病程发展[9]和药物治疗[10]的因素。

与国内外研究者发现[11, 12]的一样, 孕产妇HIV抗体WB结果假阳性较高。对于这一现象因素, Celum等[13]给出的解释是母体会产生与HIV蛋白结合的自身抗体, 这些抗体能与WB上的HIV蛋白结合。本次孕产妇复核检测双试剂均是单种试剂有反应, 所有不确定样本最终结果确定为阴性, 本次数据支持梁彩云等[14]的研究。出现这种不确定的结果容易导致孕妇焦虑和恐慌[15], 建议对HIV抗体不确定的孕产妇应做阴性倾向对待, 并尽快开展流行病学调查和HIV-1核酸检测, 尽早诊断。

已有大量研究表明gp160和p24单一带型假阳性较高, gag带不确定与HIV感染关系不大, 而env带不确定相对而言更有意义[8]。本次研究gp160+p24的阳转率为90.63%, 国内有研究表明gp160+p24阳转率为100%[6], 也有阳转率与本研究相似的结果[17, 18], 同时也存在有该条带阳转率较低的情况[7]。据分析, 在筛查之后都用1~2种试剂进行复核检测, 复核试验全为阴性的则不再进行WB的补充试验[20]。所以, 对筛查为阳性的标本进行复核试验, 有利于减少WB抗体不确定的产生, 这个观点与夏燕等[20]一致。在本研究复核试验使用的快速法结果表明, 双反应的带型大部分转阳, 而单反应的带型大多转阴; 单反应的单一带型阳转率为0%, 双反应的组合型带型阳转率为100%, 这个结果与严亚军[21]的相一致。而3条及以上组合带型, 无论快速法是否双反应阳转率均为100%, 在别的研究中, 如不将孕妇等特殊人群计算入内其阳转率也是100%[22, 23, 24]。双反应的组合型条带和3条及以上组合型条带提示标本有较大感染风险, 该结果做阳性倾向考虑, 可补做核酸检测试验。

在本次研究中, 病毒载量> 5 000 CPs/mL病例经随访后均阳转, 而病毒载量≤ 5 000 CPs/mL的标本最终均排除感染。虽然HIV-1核酸检测技术在本研究中表现卓越, 但有研究表明[25]如果感染者接受了逆转录病毒治疗或使用某些外用生殖器药物, 均有可能快速降低感染者体内的病毒载量, 使得核酸检测呈假阴性。美国也有在患者否定使用逆转录药物的前提下, HIV病毒载量骤降的案例[26], 故VL检测阴性也不能排除检测者未被感染。

本次研究有两个发现, 一是对筛查为阳性的标本进行复核试验, 有利于减少WB抗体不确定性的产生; 二是在使用抗体检测呈阴性或需确定时, 选择使用核酸检测作为补充试验, 对阻止HIV病毒对疾病影响的进展和限制其传播能力起着非常关键的作用。

利益冲突声明 所有作者声明不存在利益冲突

编辑：谢永慧

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