论著
黄诒洁, 杭倩如, 徐腾姣, 张威, 翁于格, 林奕哲, 何小解, 丁艳
目的 探讨1,25二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)是否通过抑制cGAS/STING/IFN-Ⅰ信号通路使双链 DNA ( double strands DNA, dsDNA) 诱导的小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMCs)中的炎症因 子IFN-α、IFN-β分泌减少,探寻1,25(OH)2D3治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosue, SLE)的新靶点。 方法 取10只8周龄雌性C57BL/6小鼠,10%水合氯醛麻醉小鼠,腹主动脉取血,分离PBMCs,将其分为2组,第1组为dsDNA(0、20 、40、80 μg/L) 诱导组,其中0 μg/L的为对照组,筛选dsDNA最佳作用剂量。第2组PBMCs首先使用诱导dsDNA(40 μg/L)处理,然后再用1,25(OH)2D3(10-8、10-7、10-6 μmol/L)进行治疗,其中空白组为未经1,25(OH)2D3处理的0 μg/L dsDNA的小鼠PBMCs,对照组为未经1,25(OH)2D3处理的40 μg/L dsDNA的小鼠PBMCs。48 h后,采用CCK8检测各组PBMCs的细胞活力,ELISA法检测各组PBMCs中IFN-α和IFN-β的分泌水平,Western blot检测各组小鼠PBMCs中cGAS、pTBK1、pSTING、pIRF3的蛋白表达水平,观察1,25(OH)2D3对cGAS/STING/IFN-Ⅰ信号的蛋白表达及IFN-α、IFN-β分泌的影响。结果 dsDNA剂量依赖性地使PBMCs的细胞活力显著下降(P<0.01),在40 μg/L的dsDNA时,细胞活力差异较显著性,且dsDNA剂量依赖性地促进炎症因子IFN-α和IFN-β的分泌(P<0.01),小鼠PBMCs中cGAS、pTBK1、pSTING、pIRF3的表达水平较对照组上调(P<0.05)。在1,25(OH)2D3治疗dsDNA诱导PBMCs 的细胞组中,1,25(OH)2D3剂量依赖性地使dsDNA处理的PBMCs 细胞活力显著提升(P<0.01),降低了炎症因子IFN-α和IFN-β的分泌(P<0.01),在加入1,25(OH)2D3治疗的dsDNA处理的PBMCs中cGAS、pTBK1、pSTING、pIRF3、IFN-Ⅰ的表达水平较对照组下调(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可负反馈调节dsDNA激活PBMCs中的cGAS/STING/IFN-Ⅰ信号通路且降低炎症因子的IFN-α和IFN-β的分泌。