目的 克隆大劣按蚊卵黄蛋白原cDNA,进行序列分析,并研究该基因在不同蚊期的转录水平变化。方法 首先提取大劣按蚊总RNA,反转录成cDNA;然后设计昆虫卵黄蛋白原简并引物,以该cDNA为模板进行PCR扩增和测序,对所获取的序列进行生物信息学分析;最后利用实时荧光定量PCR方法检测卵黄蛋白原基因在蚊卵、幼虫、蛹和成蚊各时期的转录水平变化。结果 PCR成功扩增出了清晰的单一目的条带,经测序为一段1 071 bp的序列,BLAST比对分析显示该序列与浅色按蚊、库态按蚊和斯氏按蚊的卵黄蛋白基因同源性高达90%,与冈比亚按蚊、微小按蚊和美彩按蚊的同源性达89%。对大劣按蚊各时期卵黄蛋白原转录水平的研究结果显示,4 d龄按蚊卵黄蛋白原 mRNA水平是3 d龄按蚊的15.2倍,而吸血后卵黄蛋白原mRNA水平高效上调,是未吸血组的955.7倍（P<0.01）;吸血组6 d龄按蚊卵黄蛋白原mRNA表达较吸血组4 d龄按蚊骤降（下降近1 870倍）,而与未吸血组6 d龄按蚊相比,差异无统计学意义。结论 本研究成功地克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的cDNA;大劣按蚊血餐后24 h卵黄蛋白原基因高效表达,提示卵黄蛋白原基因可能参与了大劣按蚊蚊卵的发育。
目的 构建小鼠成纤维细胞生长因子受体1/巨噬细胞炎性蛋白3a-Fc融合基因（FGFR1/MIP3a-Fc）的真核表达质粒,并在293T细胞中的表达。方法 设计合成FGFR1/MIP3a融合基因引物,用PCR方法扩增获得FGFR1/MIP3a基因片段,用内切酶消化后插入pcDNA3.1(+)/Fc (Mouse IgG2a)质粒中,构建FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒;经PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该融合基因表达质粒瞬时转染293T细胞,用ELISA法检测其在293T细胞的表达。结果 经PCR、酶切鉴定以及测序证实,FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功;ELISA检测FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒能够在293T细胞中表达。结论 FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功,该质粒能够在293T细胞中表达。
目的 筛选并验证日本血吸虫感染后,肝脏枯否细胞（Kupffer cells,KCs）内差异表达microRNAs（miRNAs）及基因。方法 实验小鼠随机分为对照组、感染日本血吸虫组。用密度梯度离心和流式分选相结合的方法,分离肝脏F4/80hiCD11blo枯否细胞。取感染后6周样本进行miRNA芯片和转录组测序分析,并利用实时荧光定量PCR方法进行验证。结果 与对照组相比,感染组肝脏F4/80hiCD11blo枯否细胞数量急剧减少,与此同时感染组肝脏逐渐出现 F4/80loCD11bhi非实质细胞。采用感染后6周宿主肝脏 F4/80hiCD11blo枯否细胞样本进行miRNA芯片和转录组测序分析,与对照组相比,感染组肝脏枯否细胞差异表达的miRNAs有106条,差异表达基因为1 083个,其中包含多个趋化因子。结论 日本血吸虫感染导致宿主肝脏F4/80hiCD11blo枯否细胞数量显著减少,并鉴定一批差异表达的miRNAs和基因。
目的 掌握兴山县钩端螺旋体病（钩体病）宿主动物带菌及人群免疫水平,为进一步做好钩体病的预防与控制提供依据。方法 按照《全国钩端螺旋体病监测方案》开展鼠、家畜、青蛙等宿主动物带菌调查及健康人群血清学监测。结果 平均鼠密度为1.80%。鼠种构成以黄胸鼠、小家鼠和黑线姬鼠为优势种, 平均带菌率为3.75%。共检测病人尿液及家畜、青蛙、稻田疫水等7类样本565份,培养阳性菌株4株,阳性率为0.71%,其中稻田疫水2株,病人尿液、蛙肾各1株,菌株经鉴定黄疸出血群1株,秋季热群3株。人群钩体抗体阳性率平均为28.62%, 青壮年阳性率较高,以黄疸出血型、七日热型、流感伤寒型、波摩那型为主。在监测中发现1例在农贸市场感染的经济型钩体病。结论 兴山县钩体宿主动物带菌率低, 血清学显示人群钩体隐性感染率较低, 在山区型钩体自然疫源地存在的情况下,其发病率与社会因素和自然因素密切相关。农贸市场、畜牧养殖区及其周边为经济型钩体病疫源地,病例分析已经得到证实,建议今后应将其纳入预防和监测范围。
目的 探讨感染乙型肝炎病毒（HBV）的父亲血清中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）载量对其新生儿是否携带HBV-DNA的影响,以明确需要阻断HBV父婴垂直的人群。方法 以父亲乙肝病毒表面抗原（HBsAg）阳性,母亲乙肝病毒表面抗原（HBsAg）以及HBV-DNA均阴性的56对夫妻作为研究对象,收集夫妻双方血清以及新生儿的脐带血血清,检测血清中乙型肝炎标志物、HBV-DNA载量。以新生儿HBV-DNA载量结果作为分组依据,比较两组父亲HBV-DNA载量。结果 以新生儿HBV-DNA载量结果作为分组依据,新生儿血清HBV-DNA阳性父亲HBV-DNA的载量显著高于新生儿HBV-DNA阴性者父亲HBV-DNA的载量（P<0.01）。结论 男性血清HBV-DNA阳性并且载量>106 copies/mL是HBV的父婴垂直传播的重要影响因素,可以通过孕前降低男性血清中HBV-DNA的病毒载量来降低HBV垂直传播的几率。
