论著
陈胜林, 方圆, 李元元, 孟军, 蒋智华, 陈木新, 冯向阳, 杨丽敏, 李雪, 凌峰, 陈豫, 李石柱
目的 调查广西壮族自治区南宁市三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)标本携带病毒的种类及其流行情况。方法 2023年8月在广西壮族自治区南宁市采集三带喙库蚊标本,将标本研磨液平行接种金黄地鼠肾细胞(BHK-21细胞)和白纹伊蚊卵细胞(C6/36细胞)2种细胞系进行病毒分离,并提取出现明显细胞病变(cytopathic effect)的细胞上清液RNA进行分子生物学检测。阳性分离物分别使用黄病毒属、甲病毒属和布尼亚病毒属特异引物进行鉴定,并对阳性扩增产物进行一代测序和序列分析。一代测序无效,则对提取的RNA进行高通量测序。结果 共采集到3 400只三带喙库蚊,经细胞培养分离到1株可以引起C6/36细胞稳定病变的毒株(编号S81)。属特异引物扩增均为阴性,高通量测序获得1株全基因组序列。该新分离病毒的全基因组序列经序列比对分析证实为勐海弹状病毒(Menghai rhabdovirus, MERV)。该MERV为单链RNA病毒,基因组全编码区长为10 681 nt,共编码5种典型的弹状病毒蛋白质:核壳蛋白(nucleocapsid protein, N)、磷蛋白(phosphoprotein, P)、基质蛋白(matrix protein, M)、糖蛋白(glycoprotein, G)、大聚合酶蛋白(large polymerase protein, L),以及另外一种小型假定蛋白质(small hypothetical protein, SH)。依赖RNA的RNA聚合酶 (RNA-directed RNA polymerase)全基因编码序列核苷酸和氨基酸的同源性分析均表明新分离的MERV与2010年云南省勐海县采集白纹伊蚊中分离的MERV同源性最高,核苷酸同源性为95.2%,氨基酸同源性为98.8%。系统进化分析显示MERV S81分离株隶属于弹状病毒Almendravirus属,并与2010年我国首次在云南省勐海县白纹伊蚊中分离到的MERV亲缘关系最为接近。结论 本研究首次从广西壮族自治区三带喙库蚊野外种群中分离出Almendravirus属病毒MERV。